Как може да се използва elisa за идентифициране на bt царевица?

Техниката ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ) може да се използва за идентифициране на Bt царевица (генетично модифицирана царевица, експресираща инсектицидния протеин от Bacillus thuringiensis) чрез откриване на наличието на Bt протеин в проби от царевица. Ето как работи:

1. Подготовка на пробите:Пробите от царевица се събират и се смилат на фин прах. След това пробата се екстрахира с буферен разтвор за освобождаване на протеините, включително Bt протеина.

2. Покриване на ямките на микроплаката:Ямките на микроплаката са покрити с улавящо антитяло, специфично за Bt протеина. Това антитяло е имобилизирано на повърхността на ямките.

3. Инкубация с екстракт от проба:Екстрактът от проба от царевица се добавя към ямките на микроплаката и се инкубира за определен период, позволявайки на Bt протеина да се свърже с улавящото антитяло.

4. Стъпки на промиване:След инкубиране, ямките се промиват с буферен разтвор, за да се отстранят всички несвързани вещества.

5. Добавяне на антитяло за откриване:Антитяло за откриване, което е конюгирано с ензим (обикновено пероксидаза от хрян), се добавя към ямките. Това антитяло за откриване е специфично за различен епитоп на Bt протеина от улавящото антитяло.

6. Втора инкубация:Микроплаката се инкубира отново, което позволява на антитялото за откриване да се свърже с Bt протеина, уловен от антитялото за улавяне.

7. Добавяне на субстрат:Към ямките се добавя субстратен разтвор, специфичен за ензима, конюгиран с откриващото антитяло. В присъствието на ензима, субстратът претърпява реакция, която произвежда оцветен или флуоресцентен продукт.

8. Колориметрично или флуорометрично откриване:Абсорбцията (за колориметрично откриване) или флуоресценцията (за флуорометрично откриване) на всяка ямка се измерва с помощта на четец на микроплаки.

9. Анализ на данните:Получените стойности на абсорбция или флуоресценция се сравняват със стандартна крива, генерирана с помощта на известни концентрации на Bt протеина. Това позволява количественото определяне на Bt протеина, присъстващ в пробата от царевица.

Чрез откриване на наличието и количеството на Bt протеина, ELISA може да се използва за идентифициране и разграничаване на Bt царевица от не-Bt царевични проби. Положителните резултати показват наличието на Bt протеин, докато отрицателните резултати предполагат липса на Bt протеин или нива под границата на откриване на анализа.