Wie kann ein ELISA zur Identifizierung von BT-Mais verwendet werden?

Die ELISA-Technik (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) kann zur Identifizierung von Bt-Mais (gentechnisch veränderter Mais, der das insektizide Protein von Bacillus thuringiensis exprimiert) verwendet werden, indem das Vorhandensein des Bt-Proteins in Maisproben nachgewiesen wird. So funktioniert es:

1. Probenvorbereitung:Maisproben werden gesammelt und zu einem feinen Pulver gemahlen. Anschließend wird die Probe mit einer Pufferlösung extrahiert, um die Proteine, darunter auch das Bt-Protein, freizusetzen.

2. Beschichtung der Mikrotiterplattenvertiefungen:Die Mikrotiterplattenvertiefungen werden mit einem für das Bt-Protein spezifischen Fängerantikörper beschichtet. Dieser Antikörper ist auf der Oberfläche der Vertiefungen immobilisiert.

3. Inkubation mit Probenextrakt:Der Maisprobenextrakt wird in die Vertiefungen der Mikrotiterplatte gegeben und für einen bestimmten Zeitraum inkubiert, damit das Bt-Protein an den Fängerantikörper binden kann.

4. Waschschritte:Nach der Inkubation werden die Vertiefungen mit einer Pufferlösung gewaschen, um alle ungebundenen Substanzen zu entfernen.

5. Zugabe von Nachweisantikörper:Ein Nachweisantikörper, der an ein Enzym (normalerweise Meerrettichperoxidase) konjugiert ist, wird in die Vertiefungen gegeben. Dieser Nachweisantikörper ist spezifisch für ein anderes Epitop des Bt-Proteins als der Fängerantikörper.

6. Zweite Inkubation:Die Mikroplatte wird erneut inkubiert, sodass der Nachweisantikörper an das vom Fängerantikörper eingefangene Bt-Protein binden kann.

7. Substratzugabe:Eine Substratlösung, die für das an den Nachweisantikörper konjugierte Enzym spezifisch ist, wird in die Vertiefungen gegeben. In Gegenwart des Enzyms geht das Substrat eine Reaktion ein, die ein farbiges oder fluoreszierendes Produkt erzeugt.

8. Kolorimetrischer oder fluorometrischer Nachweis:Die Absorption (für den kolorimetrischen Nachweis) oder die Fluoreszenz (für den fluorometrischen Nachweis) jeder Vertiefung wird mit einem Mikroplatten-Lesegerät gemessen.

9. Datenanalyse:Die erhaltenen Absorptions- oder Fluoreszenzwerte werden mit einer Standardkurve verglichen, die unter Verwendung bekannter Konzentrationen des Bt-Proteins erstellt wurde. Dies ermöglicht die Quantifizierung des in der Maisprobe vorhandenen Bt-Proteins.

Durch den Nachweis des Vorhandenseins und der Menge des Bt-Proteins kann ELISA verwendet werden, um Bt-Maisproben zu identifizieren und von Nicht-Bt-Maisproben zu unterscheiden. Positive Ergebnisse deuten auf das Vorhandensein des Bt-Proteins hin, während negative Ergebnisse auf das Fehlen des Bt-Proteins oder Werte unterhalb der Nachweisgrenze des Tests hinweisen.