Πώς μπορεί να χρησιμοποιηθεί ένα elisa για τον προσδιορισμό του καλαμποκιού bt;

Η τεχνική ELISA (ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία) μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αναγνώριση του καλαμποκιού Bt (γενετικά τροποποιημένο καλαμπόκι που εκφράζει την εντομοκτόνο πρωτεΐνη του Bacillus thuringiensis) ανιχνεύοντας την παρουσία της πρωτεΐνης Bt σε δείγματα καλαμποκιού. Δείτε πώς λειτουργεί:

1. Προετοιμασία δείγματος:Συλλέγονται δείγματα καλαμποκιού και αλέθονται σε λεπτή σκόνη. Το δείγμα στη συνέχεια εκχυλίζεται με ένα ρυθμιστικό διάλυμα για να απελευθερωθούν οι πρωτεΐνες, συμπεριλαμβανομένης της πρωτεΐνης Bt.

2. Επικάλυψη φρεατίων μικροπλάκας:Τα φρεάτια μικροπλάκας επικαλύπτονται με ένα αντίσωμα σύλληψης ειδικό για την πρωτεΐνη Bt. Αυτό το αντίσωμα είναι ακινητοποιημένο στην επιφάνεια των φρεατίων.

3. Επώαση με εκχύλισμα δείγματος:Το εκχύλισμα δείγματος καλαμποκιού προστίθεται στα φρεάτια της μικροπλάκας και επωάζεται για μια συγκεκριμένη περίοδο, επιτρέποντας στην πρωτεΐνη Bt να συνδεθεί με το αντίσωμα σύλληψης.

4. Βήματα πλύσης:Μετά την επώαση, τα φρεάτια πλένονται με ρυθμιστικό διάλυμα για να απομακρυνθούν τυχόν μη δεσμευμένες ουσίες.

5. Προσθήκη αντισώματος ανίχνευσης:Ένα αντίσωμα ανίχνευσης, το οποίο είναι συζευγμένο με ένα ένζυμο (συνήθως υπεροξειδάση χρένου), προστίθεται στα φρεάτια. Αυτό το αντίσωμα ανίχνευσης είναι ειδικό για διαφορετικό επίτοπο της πρωτεΐνης Bt από το αντίσωμα σύλληψης.

6. Δεύτερη επώαση:Η μικροπλάκα επωάζεται ξανά, επιτρέποντας στο αντίσωμα ανίχνευσης να συνδεθεί με την πρωτεΐνη Bt που συλλαμβάνεται από το αντίσωμα σύλληψης.

7. Προσθήκη υποστρώματος:Ένα διάλυμα υποστρώματος, ειδικό για το ένζυμο που είναι συζευγμένο με το αντίσωμα ανίχνευσης, προστίθεται στα φρεάτια. Παρουσία του ενζύμου, το υπόστρωμα υφίσταται μια αντίδραση που παράγει ένα έγχρωμο ή φθορίζον προϊόν.

8. Χρωματομετρική ή Φθορομετρική Ανίχνευση:Η απορρόφηση (για χρωματομετρική ανίχνευση) ή ο φθορισμός (για φθορομετρική ανίχνευση) κάθε φρεατίου μετράται χρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών.

9. Ανάλυση δεδομένων:Οι τιμές απορρόφησης ή φθορισμού που λαμβάνονται συγκρίνονται με μια τυπική καμπύλη που δημιουργείται χρησιμοποιώντας γνωστές συγκεντρώσεις της πρωτεΐνης Bt. Αυτό επιτρέπει τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης Bt που υπάρχει στο δείγμα καλαμποκιού.

Ανιχνεύοντας την παρουσία και την ποσότητα της πρωτεΐνης Bt, η ELISA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον εντοπισμό και τη διαφοροποίηση του καλαμποκιού Bt από τα δείγματα αραβοσίτου που δεν είναι Bt. Τα θετικά αποτελέσματα υποδεικνύουν την παρουσία της πρωτεΐνης Bt, ενώ τα αρνητικά αποτελέσματα υποδηλώνουν την απουσία της πρωτεΐνης Bt ή επίπεδα κάτω από το όριο ανίχνευσης της ανάλυσης.