¿Cuál es la receta del tampón de lisis?

Búfer de lisis es una solución que se utiliza para abrir o "lisar" células bacterianas, liberando el contenido intracelular. Es ampliamente utilizado en procedimientos de biología molecular y microbiología, como la extracción de ADN y proteínas. La composición exacta del tampón de lisis puede variar según la aplicación específica y el tipo de bacteria que se lisa, pero una receta típica incluye los siguientes componentes:

Tris-HCl (clorhidrato de tris(hidroximetil)aminometano): Esto actúa como un agente tampón para mantener el pH del tampón. El pH del tampón de lisis es crucial ya que puede afectar la estabilidad y la actividad de las enzimas involucradas en los pasos.

EDTA (ácido etilendiaminotetraacético): EDTA es un agente quelante que se une a cationes divalentes como magnesio (Mg2+) y calcio (Ca2+), que son esenciales para mantener la integridad de la pared celular bacteriana. Al quelar estos iones, el EDTA debilita la pared celular y facilita la lisis celular.

NaCl (Cloruro de sodio): Se incluye NaCl en el tampón para mantener el equilibrio osmótico y preservar la integridad estructural de las células bacterianas. La concentración adecuada de NaCl depende de la tolerancia a la sal de la bacteria específica que se está lisando.

Detergente (por ejemplo, SDS o Triton X-100): Los detergentes son componentes cruciales del tampón de lisis, ya que alteran la bicapa lipídica de la membrana celular bacteriana. El SDS (dodecilsulfato de sodio) es un detergente de uso común, pero también se pueden usar alternativas como Triton X-100 o NP-40.

Lisozima: La lisozima es una enzima que escinde específicamente los enlaces beta-1,4-glucosídicos presentes en la capa de peptidoglicano de las paredes celulares bacterianas. La suplementación con lisozima en tampón de lisis mejora la alteración celular al descomponer la red de peptidoglicanos.

RNasa (Ribonucleasa): Si el objetivo es la extracción de ARN, se puede agregar RNasa al tampón de lisis para evitar la degradación del ARN durante el procedimiento de lisis. Las enzimas RNasa degradan las moléculas de ARN escindiendo los enlaces fosfodiéster.

Proteasa (Proteinasa K): Si el objetivo es la extracción de proteínas, se puede incorporar una proteasa como la proteinasa K al tampón de lisis. La proteinasa K es una enzima robusta que puede digerir una amplia gama de proteínas sin afectar la estructura o actividad de las proteínas diana de interés.

La preparación implica disolver las cantidades adecuadas de Tris-HCl, EDTA, NaCl y el detergente seleccionado en agua destilada ultrapura o estéril. Luego, el pH se ajusta usando ácido clorhídrico concentrado (HCl) o hidróxido de sodio (NaOH) al valor deseado, típicamente alrededor de pH 8,0. Se agregan lisozima, RNasa y proteinasa K en las concentraciones recomendadas y la solución se mezcla completamente para asegurar la disolución completa de todos los componentes.

El tampón de lisis final debe almacenarse en condiciones adecuadas, normalmente -20 °C o -80 °C, para mantener su estabilidad y evitar la degradación de las enzimas. Antes de su uso, el tampón debe descongelarse y mezclarse bien para garantizar la homogeneidad.

Es importante optimizar la composición del tampón de lisis en función de las bacterias específicas que se lisan y las aplicaciones posteriores. Pueden ser necesarios ajustes en el pH, la concentración de detergente o los tipos de enzimas para lograr una lisis celular eficiente y preservar la integridad de las moléculas objetivo.