¿Cómo se puede utilizar una ELISA para identificar el maíz Bt?

La técnica ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) se puede utilizar para identificar el maíz Bt (maíz genéticamente modificado que expresa la proteína insecticida de Bacillus thuringiensis) detectando la presencia de la proteína Bt en muestras de maíz. Así es como funciona:

1. Preparación de la muestra:Se recogen muestras de maíz y se muelen hasta obtener un polvo fino. Luego, la muestra se extrae con una solución tampón para liberar las proteínas, incluida la proteína Bt.

2. Recubrimiento de los pocillos de la microplaca:Los pocillos de la microplaca están recubiertos con un anticuerpo de captura específico de la proteína Bt. Este anticuerpo está inmovilizado en la superficie de los pocillos.

3. Incubación con extracto de muestra:el extracto de muestra de maíz se agrega a los pocillos de la microplaca y se incuba durante un período específico, permitiendo que la proteína Bt se una al anticuerpo de captura.

4. Pasos de lavado:Después de la incubación, los pocillos se lavan con una solución tampón para eliminar cualquier sustancia no unida.

5. Adición de anticuerpo de detección:se agrega a los pocillos un anticuerpo de detección, que está conjugado con una enzima (generalmente peroxidasa de rábano picante). Este anticuerpo de detección es específico para un epítopo de la proteína Bt diferente al anticuerpo de captura.

6. Segunda incubación:La microplaca se incuba nuevamente, permitiendo que el anticuerpo de detección se una a la proteína Bt capturada por el anticuerpo de captura.

7. Adición de sustrato:Se agrega a los pocillos una solución de sustrato, específica de la enzima conjugada con el anticuerpo de detección. En presencia de la enzima, el sustrato sufre una reacción que produce un producto coloreado o fluorescente.

8. Detección colorimétrica o fluorométrica:La absorbancia (para la detección colorimétrica) o la fluorescencia (para la detección fluorométrica) de cada pocillo se mide utilizando un lector de microplacas.

9. Análisis de datos:Los valores de absorbancia o fluorescencia obtenidos se comparan con una curva estándar generada utilizando concentraciones conocidas de la proteína Bt. Esto permite la cuantificación de la proteína Bt presente en la muestra de maíz.

Al detectar la presencia y cantidad de proteína Bt, se puede utilizar ELISA para identificar y diferenciar muestras de maíz Bt de muestras de maíz no Bt. Los resultados positivos indican la presencia de la proteína Bt, mientras que los resultados negativos sugieren la ausencia de la proteína Bt o niveles por debajo del límite de detección del ensayo.