Kako se elisa može koristiti za identifikaciju bt kukuruza?

Tehnika ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) može se koristiti za identifikaciju Bt kukuruza (genetski modificiranog kukuruza koji eksprimira insekticidni protein iz Bacillus thuringiensis) otkrivanjem prisutnosti Bt proteina u uzorcima kukuruza. Evo kako to funkcionira:

1. Priprema uzorka:Uzimaju se uzorci kukuruza i melju u fini prah. Uzorak se zatim ekstrahira otopinom pufera kako bi se oslobodili proteini, uključujući Bt protein.

2. Oblaganje jažica mikropločice:jažice mikropločice obložene su protutijelom za hvatanje specifičnim za Bt protein. Ovo antitijelo je imobilizirano na površini jažica.

3. Inkubacija s ekstraktom uzorka:Ekstrakt uzorka kukuruza dodaje se u jažice mikropločice i inkubira određeno razdoblje, dopuštajući Bt proteinu da se veže na antitijelo za hvatanje.

4. Koraci ispiranja:Nakon inkubacije, jažice se isperu otopinom pufera kako bi se uklonile sve nevezane tvari.

5. Dodavanje antitijela za detekciju:Antitijelo za detekciju, koje je konjugirano s enzimom (obično peroksidazom hrena), dodaje se u jažice. Ovo protutijelo za otkrivanje specifično je za drugačiji epitop Bt proteina od protutijela za hvatanje.

6. Druga inkubacija:Mikroploča se ponovno inkubira, dopuštajući antitijelu za otkrivanje da se veže na Bt protein zarobljen antitijelom za hvatanje.

7. Dodavanje supstrata:Otopina supstrata, specifična za enzim konjugiran s antitijelom za detekciju, dodaje se u jažice. U prisutnosti enzima, supstrat prolazi kroz reakciju koja proizvodi obojeni ili fluorescentni produkt.

8. Kolorimetrijska ili fluorometrijska detekcija:Apsorpcija (za kolorimetrijsku detekciju) ili fluorescencija (za fluorometrijsku detekciju) svake jažice mjeri se pomoću čitača mikropločica.

9. Analiza podataka:Dobivene vrijednosti apsorbancije ili fluorescencije uspoređuju se sa standardnom krivuljom dobivenom korištenjem poznatih koncentracija Bt proteina. To omogućuje kvantifikaciju Bt proteina prisutnog u uzorku kukuruza.

Otkrivanjem prisutnosti i količine Bt proteina, ELISA se može koristiti za identifikaciju i razlikovanje Bt kukuruza od uzoraka kukuruza koji nije Bt. Pozitivni rezultati ukazuju na prisutnost Bt proteina, dok negativni rezultati upućuju na odsutnost Bt proteina ili razine ispod granice detekcije testa.