Hoe kan een elisa worden gebruikt bij het identificeren van bt-maïs?

De ELISA-techniek (enzyme-linked immunosorbent assay) kan worden gebruikt om Bt-maïs (genetisch gemodificeerde maïs die het insectendodende eiwit van Bacillus thuringiensis tot expressie brengt) te identificeren door de aanwezigheid van het Bt-eiwit in maïsmonsters te detecteren. Hier is hoe het werkt:

1. Monstervoorbereiding:maïsmonsters worden verzameld en vermalen tot een fijn poeder. Het monster wordt vervolgens geëxtraheerd met een bufferoplossing om de eiwitten vrij te maken, inclusief het Bt-eiwit.

2. Coating van microtiterplaatputjes:Microtiterplaatputjes zijn gecoat met een vangantilichaam dat specifiek is voor het Bt-eiwit. Dit antilichaam wordt geïmmobiliseerd op het oppervlak van de putjes.

3. Incubatie met monsterextract:Het maïsmonsterextract wordt aan de putjes van de microtiterplaat toegevoegd en gedurende een specifieke periode geïncubeerd, waardoor het Bt-eiwit aan het vangantilichaam kan binden.

4. Wasstappen:Na incubatie worden de putjes gewassen met een bufferoplossing om eventuele ongebonden stoffen te verwijderen.

5. Toevoeging van detectie-antilichaam:Een detectie-antilichaam, dat is geconjugeerd aan een enzym (meestal mierikswortelperoxidase), wordt aan de putjes toegevoegd. Dit detectie-antilichaam is specifiek voor een ander epitoop van het Bt-eiwit dan het vangantilichaam.

6. Tweede incubatie:De microtiterplaat wordt opnieuw geïncubeerd, waardoor het detectie-antilichaam kan binden aan het Bt-eiwit dat door het vangantilichaam is opgevangen.

7. Substraattoevoeging:Een substraatoplossing, specifiek voor het enzym dat aan het detectieantilichaam is geconjugeerd, wordt aan de putjes toegevoegd. In aanwezigheid van het enzym ondergaat het substraat een reactie die een gekleurd of fluorescerend product produceert.

8. Colorimetrische of fluorometrische detectie:De absorptie (voor colorimetrische detectie) of fluorescentie (voor fluorometrische detectie) van elk putje wordt gemeten met behulp van een microplaatlezer.

9. Gegevensanalyse:De verkregen absorptie- of fluorescentiewaarden worden vergeleken met een standaardcurve die is gegenereerd met behulp van bekende concentraties van het Bt-eiwit. Dit maakt de kwantificering van het Bt-eiwit dat aanwezig is in het maïsmonster mogelijk.

Door de aanwezigheid en hoeveelheid van het Bt-eiwit te detecteren, kan ELISA worden gebruikt om Bt-maïsmonsters te identificeren en te onderscheiden van niet-Bt-maïsmonsters. Positieve resultaten duiden op de aanwezigheid van het Bt-eiwit, terwijl negatieve resultaten wijzen op de afwezigheid van het Bt-eiwit of op niveaus onder de detectielimiet van de test.