Hva er oppskriften på Lysis buffer?
Lysebuffer er en løsning som brukes til å bryte opp eller 'lysere' bakterieceller, og frigjøre det intracellulære innholdet. Det er mye brukt i molekylærbiologi og mikrobiologiske prosedyrer, for eksempel DNA- og proteinekstraksjon. Den nøyaktige sammensetningen av lyseringsbuffer kan variere avhengig av den spesifikke applikasjonen og typen bakterier som lyseres, men en typisk oppskrift inkluderer følgende komponenter:
Tris-HCl (Tris(hydroksymetyl)aminometanhydroklorid): Dette fungerer som et buffermiddel for å opprettholde pH i bufferen. Lyseringsbufferens pH er avgjørende siden den kan påvirke stabiliteten og aktiviteten til enzymer som er involvert i trinn.
EDTA (etylendiamintetraeddiksyre): EDTA er et chelateringsmiddel som binder seg til toverdige kationer som magnesium (Mg2+) og kalsium (Ca2+), som er avgjørende for å opprettholde integriteten til bakteriecelleveggen. Ved å chelatere disse ionene, svekker EDTA celleveggen og letter cellelyse.
NaCl (natriumklorid): NaCl er inkludert i bufferen for å opprettholde osmotisk balanse og bevare den strukturelle integriteten til bakteriecellene. Den passende NaCl-konsentrasjonen avhenger av salttoleransen til de spesifikke bakteriene som lyseres.
Vaskemiddel (f.eks. SDS eller Triton X-100): Vaskemidler er avgjørende komponenter i lyseringsbufferen da de forstyrrer lipid-dobbeltlaget i bakteriecellemembranen. SDS (sodium dodecyl sulfate) er et vanlig vaskemiddel, men alternativer som Triton X-100 eller NP-40 kan også brukes.
Lysozym: Lysozym er et enzym som spesifikt spalter beta-1,4-glykosidbindingene som er tilstede i peptidoglykanlaget av bakteriecellevegger. Lysozymtilskudd i lyseringsbuffer forbedrer celleforstyrrelser ved å bryte ned peptidoglykannettverket.
RNase (ribonuklease): Hvis RNA-ekstraksjon er målet, kan RNase tilsettes til lyseringsbufferen for å forhindre nedbrytning av RNA under lyseringsprosedyren. RNase-enzymer bryter ned RNA-molekyler ved å spalte fosfodiesterbindingene.
Protease (Proteinase K): Hvis proteinekstraksjon er målet, kan en protease som Proteinase K inkorporeres i lyseringsbufferen. Proteinase K er et robust enzym som kan fordøye et bredt spekter av proteiner uten å påvirke strukturen eller aktiviteten til målproteiner av interesse.
Preparatet innebærer å løse opp passende mengder Tris-HCl, EDTA, NaCl og det valgte vaskemiddelet i ultrarent eller sterilt destillert vann. pH justeres deretter med konsentrert saltsyre (HCl) eller natriumhydroksid (NaOH) til ønsket verdi, typisk rundt pH 8,0. Lysozym, RNase og Proteinase K tilsettes i anbefalte konsentrasjoner, og løsningen blandes grundig for å sikre fullstendig oppløsning av alle komponenter.
Den endelige lyseringsbufferen bør oppbevares ved passende forhold, vanligvis -20°C eller -80°C, for å opprettholde stabiliteten og forhindre nedbrytning av enzymer. Før bruk bør bufferen tines og blandes grundig for å sikre homogenitet.
Det er viktig å optimalisere sammensetningen av lyseringsbufferen basert på de spesifikke bakteriene som lyseres og nedstrømsapplikasjonene. Justering av pH, vaskemiddelkonsentrasjon eller enzymtyper kan være nødvendig for å oppnå effektiv cellelyse og bevare integriteten til målmolekylene.
Previous:Hva er overligger laget av?
Mat og drikke
- Carob Chips vs Chocolate Chips
- Hvor mange kopper er 3 unser?
- Hvordan Kan Stekt Peppers med olje (8 trinn)
- Hva er næringsrik mat og næringsfattig mat?
- Hvorfor er Gouda sunnere enn andre Cheese
- Hva kan du gi en katt som har spist sjokolade?
- Kan teflonpanner gå i oppvaskmaskin?
- Middag ideer med svart bønnesuppe
Brød maskin oppskrifter
- En brødrister bruker 67500 joule energi på 45 sekunder for…
- Hvor kan du få instruksjoner for en Morphy Richards mikrobø…
- Hvordan lager produsenter som lever over termoklin mat?
- Når ble den første mikrobølgeovnen oppfunnet og av hvem?
- Hvem grunnla selskapet Continental Bread?
- Hva var gjennomsnittsprisen på brødmelk og egg i 2004?
- Hvordan lage cubanske brød i et brød maskin (9 trinn)
- Hva får brødet til å sprette ut av en brødrister?
- Hva kostet et pund mel i 1997?
- Hvorfor er rugbrød en skikk i Russland?