W jaki sposób można wykorzystać metodę elisa do identyfikacji kukurydzy bt?

Technikę ELISA (test immunoenzymatyczny) można zastosować do identyfikacji kukurydzy Bt (genetycznie zmodyfikowanej kukurydzy wykazującej ekspresję białka owadobójczego z Bacillus thuringiensis) poprzez wykrycie obecności białka Bt w próbkach kukurydzy. Oto jak to działa:

1. Przygotowanie próbki:Pobiera się próbki kukurydzy i miele je na drobny proszek. Próbkę następnie ekstrahuje się roztworem buforowym w celu uwolnienia białek, w tym białka Bt.

2. Powlekanie dołków mikropłytki:Dołki mikropłytek powleka się przeciwciałem wychwytującym specyficznym dla białka Bt. Przeciwciało to jest unieruchomione na powierzchni dołków.

3. Inkubacja z ekstraktem próbki:Ekstrakt z próbki kukurydzy dodaje się do dołków mikropłytki i inkubuje przez określony czas, umożliwiając związanie białka Bt z przeciwciałem wychwytującym.

4. Etapy płukania:Po inkubacji dołki przemywa się roztworem buforowym w celu usunięcia wszelkich niezwiązanych substancji.

5. Dodanie przeciwciała wykrywającego:Do ​​dołków dodaje się przeciwciało wykrywające, które jest sprzężone z enzymem (zwykle peroksydazą chrzanową). To przeciwciało wykrywające jest specyficzne dla innego epitopu białka Bt niż przeciwciało wychwytujące.

6. Druga inkubacja:Mikropłytkę inkubuje się ponownie, umożliwiając przeciwciału wykrywającemu związanie się z białkiem Bt wychwyconym przez przeciwciało wychwytujące.

7. Dodawanie substratu:Do dołków dodaje się roztwór substratu specyficzny dla enzymu sprzężonego z przeciwciałem wykrywającym. W obecności enzymu substrat ulega reakcji, w wyniku której powstaje kolorowy lub fluorescencyjny produkt.

8. Detekcja kolorymetryczna lub fluorometryczna:Absorbancję (w przypadku detekcji kolorymetrycznej) lub fluorescencję (w przypadku detekcji fluorometrycznej) każdego dołka mierzy się za pomocą czytnika mikropłytek.

9. Analiza danych:Uzyskane wartości absorbancji lub fluorescencji porównuje się z krzywą standardową wygenerowaną przy użyciu znanych stężeń białka Bt. Umożliwia to ilościowe oznaczenie białka Bt obecnego w próbce kukurydzy.

Wykrywając obecność i ilość białka Bt, można zastosować test ELISA do identyfikacji i różnicowania próbek kukurydzy Bt od próbek kukurydzy innych niż Bt. Wyniki pozytywne wskazują na obecność białka Bt, natomiast wyniki negatywne sugerują brak białka Bt lub jego poziom poniżej granicy wykrywalności testu.