Как можно использовать ИФА для идентификации кукурузы bt?

Метод ELISA (иммуноферментный анализ) можно использовать для идентификации Bt-кукурузы (генетически модифицированной кукурузы, экспрессирующей инсектицидный белок Bacillus thuringiensis) путем обнаружения присутствия белка Bt в образцах кукурузы. Вот как это работает:

1. Подготовка проб. Образцы кукурузы собираются и измельчаются в мелкий порошок. Затем образец экстрагируют буферным раствором для высвобождения белков, включая белок Bt.

2. Покрытие лунок микропланшета. Лунки микропланшета покрываются захватывающим антителом, специфичным к белку Bt. Это антитело иммобилизовано на поверхности лунок.

3. Инкубация с экстрактом образца. Экстракт образца кукурузы добавляется в лунки микропланшета и инкубируется в течение определенного периода, позволяя белку Bt связываться с захватывающим антителом.

4. Этапы промывки:после инкубации лунки промывают буферным раствором для удаления несвязавшихся веществ.

5. Добавление детектирующего антитела. В лунки добавляют детектирующее антитело, конъюгированное с ферментом (обычно пероксидазой хрена). Это детектирующее антитело специфично к другому эпитопу белка Bt, чем захватывающее антитело.

6. Вторая инкубация:микропланшет снова инкубируют, позволяя детектирующему антителу связаться с белком Bt, захваченным захватывающим антителом.

7. Добавление субстрата. В лунки добавляют раствор субстрата, специфичный к ферменту, конъюгированному с детектирующим антителом. В присутствии фермента субстрат подвергается реакции, в результате которой образуется окрашенный или флуоресцентный продукт.

8. Колориметрическое или флуорометрическое обнаружение. Поглощение (для колориметрического обнаружения) или флуоресценцию (для флуорометрического обнаружения) измеряют в каждой лунке с помощью считывающего устройства для микропланшетов.

9. Анализ данных. Полученные значения поглощения или флуоресценции сравнивают со стандартной кривой, полученной с использованием известных концентраций белка Bt. Это позволяет количественно оценить белок Bt, присутствующий в образце кукурузы.

Обнаружив наличие и количество белка Bt, ELISA можно использовать для идентификации и дифференциации кукурузы Bt от образцов кукурузы, не содержащих Bt. Положительные результаты указывают на присутствие белка Bt, тогда как отрицательные результаты предполагают отсутствие белка Bt или его уровни ниже предела обнаружения анализа.