Kako se lahko elisa uporablja za identifikacijo bt koruze?

Tehniko ELISA (encimski imunski test) lahko uporabimo za identifikacijo Bt koruze (gensko spremenjene koruze, ki izraža insekticidni protein iz Bacillus thuringiensis) z odkrivanjem prisotnosti Bt proteina v vzorcih koruze. Takole deluje:

1. Priprava vzorca:Vzorci koruze se zberejo in zmeljejo v fin prah. Vzorec se nato ekstrahira s pufersko raztopino, da se sprostijo beljakovine, vključno z beljakovino Bt.

2. Prevleka vdolbinic mikroplošče:vdolbinice mikroplošče so prevlečene z zajemnim protitelesom, specifičnim za protein Bt. To protitelo je imobilizirano na površini vdolbinic.

3. Inkubacija z izvlečkom vzorca:izvleček vzorca koruze se doda v vdolbinice mikroplošče in inkubira določen čas, kar omogoči, da se protein Bt veže na protitelesa za zajemanje.

4. Koraki izpiranja:Po inkubaciji se vdolbinice sperejo s pufrsko raztopino, da se odstranijo vse nevezane snovi.

5. Dodatek detekcijskega protitelesa:detekcijsko protitelo, ki je konjugirano z encimom (običajno hrenovo peroksidazo), se doda v jamice. To detekcijsko protitelo je specifično za drugačen epitop proteina Bt kot protitelo za zajemanje.

6. Druga inkubacija:Mikroploščo ponovno inkubiramo, kar omogoča, da se detekcijsko protitelo veže na protein Bt, ki ga ujame zajemno protitelo.

7. Dodatek substrata:V vdolbinice se doda raztopina substrata, specifična za encim, konjugiran z detekcijskim protitelesom. V prisotnosti encima se substrat podvrže reakciji, ki proizvede obarvan ali fluorescenčen produkt.

8. Kolorimetrična ali fluorometrična detekcija:absorbanco (za kolorimetrično detekcijo) ali fluorescenco (za fluorometrično detekcijo) vsake vdolbinice izmerimo z bralnikom mikroplošč.

9. Analiza podatkov:Dobljene vrednosti absorbance ali fluorescence se primerjajo s standardno krivuljo, ustvarjeno z uporabo znanih koncentracij proteina Bt. To omogoča kvantifikacijo beljakovine Bt, ki je prisotna v vzorcu koruze.

Z odkrivanjem prisotnosti in količine Bt proteina se lahko ELISA uporabi za identifikacijo in razlikovanje Bt koruze od vzorcev koruze, ki ni Bt. Pozitivni rezultati kažejo na prisotnost proteina Bt, medtem ko negativni rezultati kažejo na odsotnost proteina Bt ali ravni pod mejo detekcije testa.