Jak lze elisa použít k identifikaci bt kukuřice?

Technika ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) může být použita k identifikaci Bt kukuřice (geneticky modifikovaná kukuřice exprimující insekticidní protein z Bacillus thuringiensis) detekcí přítomnosti Bt proteinu ve vzorcích kukuřice. Funguje to takto:

1. Příprava vzorku:Vzorky kukuřice se odeberou a rozdrtí na jemný prášek. Vzorek se poté extrahuje roztokem pufru, aby se uvolnily proteiny, včetně proteinu Bt.

2. Potažení jamek mikrotitrační destičky:Jamky mikrotitrační destičky jsou potaženy záchytnou protilátkou specifickou pro protein Bt. Tato protilátka je imobilizována na povrchu jamek.

3. Inkubace s extraktem vzorku:Extrakt ze vzorku kukuřice se přidá do jamek mikrodestičky a inkubuje se po určitou dobu, což umožní proteinu Bt vázat se na záchytnou protilátku.

4. Kroky promývání:Po inkubaci se jamky promyjí roztokem pufru, aby se odstranily všechny nenavázané látky.

5. Přidání detekční protilátky:Do jamek se přidá detekční protilátka, která je konjugována s enzymem (obvykle křenovou peroxidázou). Tato detekční protilátka je specifická pro jiný epitop Bt proteinu než záchytná protilátka.

6. Druhá inkubace:Mikrodestička se znovu inkubuje, což umožní detekční protilátce navázat se na protein Bt zachycený záchytnou protilátkou.

7. Přidání substrátu:Do jamek se přidá roztok substrátu, specifický pro enzym konjugovaný s detekční protilátkou. V přítomnosti enzymu podléhá substrát reakci, která vytváří barevný nebo fluorescenční produkt.

8. Kolorimetrická nebo fluorometrická detekce:Absorbance (pro kolorimetrickou detekci) nebo fluorescence (pro fluorometrickou detekci) každé jamky se měří pomocí čtečky mikrodestiček.

9. Analýza dat:Získané hodnoty absorbance nebo fluorescence se porovnají se standardní křivkou vytvořenou za použití známých koncentrací proteinu Bt. To umožňuje kvantifikaci Bt proteinu přítomného ve vzorku kukuřice.

Detekcí přítomnosti a množství Bt proteinu lze ELISA použít k identifikaci a odlišení Bt kukuřice od vzorků jiné než Bt kukuřice. Pozitivní výsledky ukazují na přítomnost Bt proteinu, zatímco negativní výsledky naznačují nepřítomnost Bt proteinu nebo hladiny pod detekčním limitem testu.