Hvad er opskriften på Lysis buffer?
Lysebuffer er en opløsning, der bruges til at bryde op eller 'lyse' bakterieceller og frigive det intracellulære indhold. Det er meget udbredt i molekylærbiologi og mikrobiologiske procedurer, såsom DNA- og proteinekstraktion. Den nøjagtige sammensætning af lyseringsbuffer kan variere afhængigt af den specifikke anvendelse og typen af bakterier, der lyseres, men en typisk opskrift omfatter følgende komponenter:
Tris-HCl (Tris(hydroxymethyl)aminomethanhydrochlorid): Dette fungerer som et buffermiddel til at opretholde bufferens pH. Lysebufferens pH er afgørende, da det kan påvirke stabiliteten og aktiviteten af enzymer involveret i trin.
EDTA (ethylendiamintetraeddikesyre): EDTA er et chelateringsmiddel, der binder til divalente kationer som magnesium (Mg2+) og calcium (Ca2+), som er essentielle for at opretholde integriteten af bakteriecellevæggen. Ved at chelatere disse ioner svækker EDTA cellevæggen og letter cellelyse.
NaCl (natriumchlorid): NaCl er inkluderet i bufferen for at opretholde osmotisk balance og bevare bakteriecellernes strukturelle integritet. Den passende NaCl-koncentration afhænger af salttolerancen af de specifikke bakterier, der lyseres.
Vaskemiddel (f.eks. SDS eller Triton X-100): Detergenter er afgørende komponenter i lysisbufferen, da de forstyrrer lipid-dobbeltlaget i bakteriecellemembranen. SDS (natriumdodecylsulfat) er et almindeligt brugt vaskemiddel, men alternativer som Triton X-100 eller NP-40 kan også bruges.
Lysozym: Lysozym er et enzym, der specifikt spalter de beta-1,4-glykosidiske bindinger, der er til stede i peptidoglycanlaget af bakterielle cellevægge. Lysozymtilskud i lysisbuffer øger celleforstyrrelser ved at nedbryde peptidoglycan-netværket.
RNase (ribonuklease): Hvis RNA-ekstraktion er målet, kan RNase tilsættes til lyseringsbufferen for at forhindre nedbrydning af RNA under lysisproceduren. RNase-enzymer nedbryder RNA-molekyler ved at spalte phosphodiester-bindingerne.
Protease (Proteinase K): Hvis proteinekstraktion er målet, kan en protease som Proteinase K inkorporeres i lysisbufferen. Proteinase K er et robust enzym, der kan fordøje en lang række proteiner uden at påvirke strukturen eller aktiviteten af målproteiner af interesse.
Præparatet involverer opløsning af passende mængder af Tris-HCl, EDTA, NaCl og det valgte rengøringsmiddel i ultrarent eller sterilt destilleret vand. pH-værdien justeres derefter med koncentreret saltsyre (HCl) eller natriumhydroxid (NaOH) til den ønskede værdi, typisk omkring pH 8,0. Lysozym, RNase og Proteinase K tilsættes i de anbefalede koncentrationer, og opløsningen blandes grundigt for at sikre fuldstændig opløsning af alle komponenter.
Den endelige lysebuffer bør opbevares ved passende betingelser, sædvanligvis -20°C eller -80°C, for at bevare dens stabilitet og forhindre nedbrydning af enzymer. Før brug skal bufferen optøs og blandes grundigt for at sikre homogenitet.
Det er vigtigt at optimere sammensætningen af lyseringsbufferen baseret på de specifikke bakterier, der lyseres, og de efterfølgende applikationer. Justering af pH, detergentkoncentration eller enzymtyper kan være nødvendige for at opnå effektiv cellelyse og bevare integriteten af målmolekyler.
Previous:Hvad er overligger lavet af?
Mad og Drikke
- Hvilken rolle spiller gær i fremstillingen af øl?
- Hvor højt fra gulvet sætter du afløbsrør til køkkenvask…
- Hvad er en metafor for, at han kunne lide duften af kager?…
- Er en åkande forbrugere nedbrydere eller producenter?
- Hvad er der i universalmel?
- Sådan Gør Smør og fløde Kombiner i Alfredo Sauce
- Hvor kan jeg finde opskrifter til aftensmad i aften?
- Påvirker eller kan glas smag af øl?
Brød Machine Opskrifter
- Hvad sker der under hævefasen af brødfremstilling?
- Hvordan bruger du en FoodSaver Vacuum Sealer?
- Sådan får Paddle Ud af brød bagt i en Sunbeam Breadmaker
- Indeholder gærbrød bagepulver?
- Hvordan afskaller fabrikker valnødder?
- Hvor mange rødbeder skal jeg bruge til 450 gram?
- Hvad er organisationshierarkiet i Pizza Hut?
- Hvad er svaret på analogi mælkedagbøger som brød hvad?
- Hvilke programmer tilbydes på Le Cordon Bleu kokkeskole?
- Hvad er det tilsvarende mål for at bruge æblemos i stedet …