Hvordan kan en elisa bruges til at identificere bt majs?

ELISA-teknikken (enzyme-linked immunosorbent assay) kan bruges til at identificere Bt-majs (genetisk modificeret majs, der udtrykker det insekticide protein fra Bacillus thuringiensis) ved at detektere tilstedeværelsen af ​​Bt-proteinet i majsprøver. Sådan fungerer det:

1. Prøveforberedelse:Majsprøver opsamles og males til et fint pulver. Prøven ekstraheres derefter med en bufferopløsning for at frigive proteinerne, herunder Bt-proteinet.

2. Coating af mikropladebrønde:Mikropladebrønde er coatet med et indfangningsantistof, der er specifikt for Bt-proteinet. Dette antistof er immobiliseret på overfladen af ​​brøndene.

3. Inkubation med prøveekstrakt:Majsprøveekstraktet tilsættes til mikropladebrøndene og inkuberes i en specifik periode, hvilket tillader Bt-proteinet at binde til indfangningsantistoffet.

4. Vasketrin:Efter inkubation vaskes brøndene med en bufferopløsning for at fjerne eventuelle ubundne stoffer.

5. Tilsætning af detektionsantistof:Et påvisningsantistof, som er konjugeret til et enzym (normalt peberrodsperoxidase), tilsættes til brøndene. Dette påvisningsantistof er specifikt for en anden epitop af Bt-proteinet end indfangningsantistoffet.

6. Anden inkubation:Mikropladen inkuberes igen, hvilket tillader detektionsantistoffet at binde til Bt-proteinet, der er fanget af indfangningsantistoffet.

7. Substrattilsætning:En substratopløsning, specifik for enzymet konjugeret til detektionsantistoffet, tilsættes til brøndene. I nærvær af enzymet gennemgår substratet en reaktion, der producerer et farvet eller fluorescerende produkt.

8. Kolorimetrisk eller fluorometrisk påvisning:Absorbansen (til kolorimetrisk påvisning) eller fluorescens (til fluorometrisk påvisning) af hver brønd måles ved hjælp af en mikropladelæser.

9. Dataanalyse:De opnåede absorbans- eller fluorescensværdier sammenlignes med en standardkurve genereret under anvendelse af kendte koncentrationer af Bt-proteinet. Dette muliggør kvantificering af Bt-proteinet, der er til stede i majsprøven.

Ved at detektere tilstedeværelsen og mængden af ​​Bt-proteinet kan ELISA bruges til at identificere og differentiere Bt-majs fra ikke-Bt-majsprøver. Positive resultater indikerer tilstedeværelsen af ​​Bt-proteinet, mens negative resultater tyder på fraværet af Bt-proteinet eller niveauer under analysens detektionsgrænse.