Comment un test Elisa peut-il être utilisé pour identifier le maïs Bt ?

La technique ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) peut être utilisée pour identifier le maïs Bt (maïs génétiquement modifié exprimant la protéine insecticide de Bacillus thuringiensis) en détectant la présence de la protéine Bt dans des échantillons de maïs. Voici comment cela fonctionne :

1. Préparation des échantillons :Des échantillons de maïs sont collectés et broyés en une poudre fine. L'échantillon est ensuite extrait avec une solution tampon pour libérer les protéines, dont la protéine Bt.

2. Revêtement des puits de microplaque :les puits de microplaque sont recouverts d'un anticorps de capture spécifique à la protéine Bt. Cet anticorps est immobilisé à la surface des puits.

3. Incubation avec l'extrait d'échantillon :L'extrait d'échantillon de maïs est ajouté aux puits de la microplaque et incubé pendant une période spécifique, permettant à la protéine Bt de se lier à l'anticorps de capture.

4. Étapes de lavage :Après l'incubation, les puits sont lavés avec une solution tampon pour éliminer toutes les substances non liées.

5. Ajout d'anticorps de détection :Un anticorps de détection, conjugué à une enzyme (généralement de la peroxydase de raifort), est ajouté aux puits. Cet anticorps de détection est spécifique d'un épitope de la protéine Bt différent de celui de l'anticorps de capture.

6. Deuxième incubation :La microplaque est à nouveau incubée, permettant à l'anticorps de détection de se lier à la protéine Bt capturée par l'anticorps de capture.

7. Ajout de substrat :Une solution de substrat, spécifique à l'enzyme conjuguée à l'anticorps de détection, est ajoutée aux puits. En présence de l'enzyme, le substrat subit une réaction qui produit un produit coloré ou fluorescent.

8. Détection colorimétrique ou fluorométrique :L'absorbance (pour la détection colorimétrique) ou la fluorescence (pour la détection fluorométrique) de chaque puits est mesurée à l'aide d'un lecteur de microplaques.

9. Analyse des données :Les valeurs d'absorbance ou de fluorescence obtenues sont comparées à une courbe standard générée à l'aide de concentrations connues de la protéine Bt. Cela permet la quantification de la protéine Bt présente dans l’échantillon de maïs.

En détectant la présence et la quantité de protéine Bt, l’ELISA peut être utilisé pour identifier et différencier les échantillons de maïs Bt des échantillons de maïs non Bt. Les résultats positifs indiquent la présence de la protéine Bt, tandis que les résultats négatifs suggèrent l'absence de la protéine Bt ou des taux inférieurs à la limite de détection du test.