Hvernig er hægt að nota elisu til að bera kennsl á bt korn?

ELISA (ensímtengd ónæmissogandi próf) tækni er hægt að nota til að bera kennsl á Bt maís (erfðabreytt maís sem tjáir skordýraeyðandi próteinið frá Bacillus thuringiensis) með því að greina tilvist Bt próteins í maíssýnum. Svona virkar það:

1. Sýnaundirbúningur:Maíssýni eru safnað og maluð í fínt duft. Sýnið er síðan dregið út með jafnalausn til að losa próteinin, þar á meðal Bt próteinið.

2. Húðun á örplataholum:Örplötuholur eru húðaðir með fangamótefni sem er sérstakt fyrir Bt próteinið. Þetta mótefni er óhreyft á yfirborði brunnanna.

3. Ræktun með sýnisútdrætti:maíssýnisþykkninu er bætt við smáplötuholurnar og ræktað í tiltekið tímabil, sem gerir Bt próteininu kleift að bindast fangamótefninu.

4. Þvottaskref:Eftir ræktun eru holurnar þvegnar með jafnalausn til að fjarlægja öll óbundin efni.

5. Bæta við greiningarmótefni:Greiningarmótefni, sem er samtengt við ensím (venjulega piparrótarperoxídasa), er bætt við brunnana. Þetta greiningarmótefni er sértækt fyrir aðra myndefni Bt próteins en fangamótefnið.

6. Önnur ræktun:Örplatan er ræktuð aftur, sem gerir greiningarmótefninu kleift að bindast Bt próteininu sem fanga mótefnið.

7. Undirlagsuppbót:Hvarfefnislausn, sértæk fyrir ensímið sem er samtengt við greiningarmótefnið, er bætt við brunnana. Í nærveru ensímsins fer hvarfefnið undir viðbrögð sem framleiðir litaða eða flúrljómandi vöru.

8. Litamælingar eða flúormælingar:Gleypið (fyrir litamælingar) eða flúrljómun (fyrir flúormælingar) hvers brunns er mælt með því að nota örplötulesara.

9. Gagnagreining:Gleypi- eða flúrljómunargildin sem fást eru borin saman við staðlaða feril sem myndast með því að nota þekktan styrk Bt próteins. Þetta gerir kleift að magngreina Bt próteinið sem er til staðar í maíssýninu.

Með því að greina nærveru og magn Bt próteins er hægt að nota ELISA til að bera kennsl á og greina Bt korn frá sýnum sem ekki eru Bt. Jákvæðar niðurstöður benda til þess að Bt próteinið sé til staðar, en neikvæðar niðurstöður benda til þess að Bt próteinið sé ekki til eða magn undir greiningarmörkum greiningarprófsins.