Come può essere utilizzata l'elisa per identificare il mais bt?

La tecnica ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) può essere utilizzata per identificare il mais Bt (mais geneticamente modificato che esprime la proteina insetticida del Bacillus thuringiensis) rilevando la presenza della proteina Bt nei campioni di mais. Ecco come funziona:

1. Preparazione del campione:i campioni di mais vengono raccolti e macinati in una polvere fine. Il campione viene quindi estratto con una soluzione tampone per rilasciare le proteine, inclusa la proteina Bt.

2. Rivestimento dei pozzetti della micropiastra:i pozzetti della micropiastra sono rivestiti con un anticorpo di cattura specifico per la proteina Bt. Questo anticorpo è immobilizzato sulla superficie dei pozzetti.

3. Incubazione con l'estratto del campione:l'estratto del campione di mais viene aggiunto ai pozzetti della micropiastra e incubato per un periodo specifico, consentendo alla proteina Bt di legarsi all'anticorpo di cattura.

4. Fasi di lavaggio:dopo l'incubazione, i pozzetti vengono lavati con una soluzione tampone per rimuovere eventuali sostanze non legate.

5. Aggiunta dell'anticorpo di rilevamento:ai pozzetti viene aggiunto un anticorpo di rilevamento coniugato a un enzima (solitamente perossidasi di rafano). Questo anticorpo di rilevamento è specifico per un epitopo diverso della proteina Bt rispetto all'anticorpo di cattura.

6. Seconda incubazione:la micropiastra viene nuovamente incubata, consentendo all'anticorpo di rilevamento di legarsi alla proteina Bt catturata dall'anticorpo di cattura.

7. Aggiunta del substrato:una soluzione substrato, specifica per l'enzima coniugato all'anticorpo di rilevamento, viene aggiunta ai pozzetti. In presenza dell'enzima il substrato subisce una reazione che produce un prodotto colorato o fluorescente.

8. Rilevazione colorimetrica o fluorometrica:l'assorbanza (per la rilevazione colorimetrica) o la fluorescenza (per la rilevazione fluorimetrica) di ciascun pozzetto viene misurata utilizzando un lettore di micropiastre.

9. Analisi dei dati:i valori di assorbanza o fluorescenza ottenuti vengono confrontati con una curva standard generata utilizzando concentrazioni note della proteina Bt. Ciò consente la quantificazione della proteina Bt presente nel campione di mais.

Rilevando la presenza e la quantità della proteina Bt, l'ELISA può essere utilizzato per identificare e differenziare campioni di mais Bt da campioni di mais non Bt. I risultati positivi indicano la presenza della proteina Bt, mentre i risultati negativi suggeriscono l'assenza della proteina Bt o livelli inferiori al limite di rilevamento del test.