Hvordan kan en elisa brukes til å identifisere bt-mais?

ELISA-teknikken (enzyme-linked immunosorbent assay) kan brukes til å identifisere Bt-mais (genmodifisert mais som uttrykker det insekticide proteinet fra Bacillus thuringiensis) ved å påvise tilstedeværelsen av Bt-proteinet i maisprøver. Slik fungerer det:

1. Prøveforberedelse:Maisprøver samles og males til et fint pulver. Prøven ekstraheres deretter med en bufferløsning for å frigjøre proteinene, inkludert Bt-proteinet.

2. Belegg av mikroplatebrønner:Mikroplatebrønner er belagt med et fangeantistoff spesifikt for Bt-proteinet. Dette antistoffet er immobilisert på overflaten av brønnene.

3. Inkubasjon med prøveekstrakt:Maisprøveekstraktet tilsettes mikroplatebrønnene og inkuberes i en bestemt periode, slik at Bt-proteinet binder seg til fangeantistoffet.

4. Vasketrinn:Etter inkubering vaskes brønnene med en bufferløsning for å fjerne eventuelle ubundne stoffer.

5. Tilsetning av deteksjonsantistoff:Et deteksjonsantistoff, som er konjugert til et enzym (vanligvis pepperrotperoksidase), tilsettes brønnene. Dette deteksjonsantistoffet er spesifikt for en annen epitop av Bt-proteinet enn innfangningsantistoffet.

6. Andre inkubasjon:Mikroplaten inkuberes igjen, slik at deteksjonsantistoffet binder seg til Bt-proteinet som fanges opp av fangeantistoffet.

7. Substrattilsetning:En substratløsning, spesifikk for enzymet konjugert til deteksjonsantistoffet, tilsettes brønnene. I nærvær av enzymet gjennomgår substratet en reaksjon som produserer et farget eller fluorescerende produkt.

8. Kolorimetrisk eller fluorometrisk deteksjon:Absorbansen (for kolorimetrisk deteksjon) eller fluorescens (for fluorometrisk deteksjon) for hver brønn måles ved hjelp av en mikroplateleser.

9. Dataanalyse:Absorbans- eller fluorescensverdiene som oppnås sammenlignes med en standardkurve generert ved bruk av kjente konsentrasjoner av Bt-proteinet. Dette tillater kvantifisering av Bt-proteinet som er tilstede i maisprøven.

Ved å påvise tilstedeværelsen og mengden av Bt-proteinet, kan ELISA brukes til å identifisere og differensiere Bt-mais fra ikke-Bt-maisprøver. Positive resultater indikerer tilstedeværelsen av Bt-proteinet, mens negative resultater antyder fravær av Bt-proteinet eller nivåer under deteksjonsgrensen for analysen.