Como um Elisa pode ser usado na identificação de milho Bt?

A técnica ELISA (ensaio imunoenzimático) pode ser usada para identificar milho Bt (milho geneticamente modificado que expressa a proteína inseticida de Bacillus thuringiensis) detectando a presença da proteína Bt em amostras de milho. Veja como funciona:

1. Preparação da amostra:As amostras de milho são coletadas e moídas até formar um pó fino. A amostra é então extraída com uma solução tampão para liberar as proteínas, incluindo a proteína Bt.

2. Revestimento dos Poços da Microplaca:Os poços da microplaca são revestidos com um anticorpo de captura específico para a proteína Bt. Este anticorpo é imobilizado na superfície dos poços.

3. Incubação com Extrato de Amostra:O extrato de amostra de milho é adicionado aos poços da microplaca e incubado por um período específico, permitindo que a proteína Bt se ligue ao anticorpo de captura.

4. Etapas de lavagem:Após a incubação, os poços são lavados com uma solução tampão para remover quaisquer substâncias não ligadas.

5. Adição de Anticorpo de Detecção:Um anticorpo de detecção, que é conjugado a uma enzima (geralmente peroxidase de rábano), é adicionado aos poços. Este anticorpo de detecção é específico para um epítopo da proteína Bt diferente do anticorpo de captura.

6. Segunda Incubação:A microplaca é incubada novamente, permitindo que o anticorpo de detecção se ligue à proteína Bt capturada pelo anticorpo de captura.

7. Adição de Substrato:Uma solução de substrato, específica para a enzima conjugada ao anticorpo de detecção, é adicionada aos poços. Na presença da enzima, o substrato sofre uma reação que produz um produto colorido ou fluorescente.

8. Detecção Colorimétrica ou Fluorométrica:A absorvância (para detecção colorimétrica) ou fluorescência (para detecção fluorométrica) de cada poço é medida utilizando um leitor de microplacas.

9. Análise de Dados:Os valores de absorvância ou fluorescência obtidos são comparados com uma curva padrão gerada utilizando concentrações conhecidas da proteína Bt. Isto permite a quantificação da proteína Bt presente na amostra de milho.

Ao detectar a presença e a quantidade da proteína Bt, o ELISA pode ser usado para identificar e diferenciar amostras de milho Bt de amostras de milho não Bt. Resultados positivos indicam a presença da proteína Bt, enquanto resultados negativos sugerem ausência da proteína Bt ou níveis abaixo do limite de detecção do ensaio.