BT mısırının tanımlanmasında elisa nasıl kullanılabilir?

ELISA (enzime bağlı immünosorbent tahlili) tekniği, mısır numunelerinde Bt proteininin varlığını tespit ederek Bt mısırını (Bacillus thuringiensis'ten böcek öldürücü proteini eksprese eden genetiği değiştirilmiş mısır) tanımlamak için kullanılabilir. İşte nasıl çalışıyor:

1. Numune Hazırlama:Mısır numuneleri toplanır ve ince toz haline getirilir. Numune daha sonra Bt proteini de dahil olmak üzere proteinleri serbest bırakmak için bir tampon çözeltisiyle ekstrakte edilir.

2. Mikroplaka Kuyularının Kaplaması:Mikroplaka kuyucukları, Bt proteinine özgü bir yakalama antikoru ile kaplanır. Bu antikor kuyucukların yüzeyinde hareketsiz hale getirilir.

3. Numune Ekstraktı ile İnkübasyon:Mısır numunesi ekstraktı mikroplaka kuyularına eklenir ve belirli bir süre inkübe edilerek Bt proteininin yakalama antikoruna bağlanması sağlanır.

4. Yıkama Adımları:İnkübasyondan sonra, bağlanmamış maddelerin uzaklaştırılması için kuyucuklar bir tampon solüsyonu ile yıkanır.

5. Saptama Antikorunun Eklenmesi:Bir enzime (genellikle yaban turpu peroksidazı) konjuge edilmiş bir saptama antikoru kuyucuklara eklenir. Bu tespit antikoru, Bt proteininin yakalama antikorundan farklı bir epitopuna spesifiktir.

6. İkinci İnkübasyon:Mikroplak tekrar inkübe edilerek tespit antikorunun, yakalama antikoru tarafından yakalanan Bt proteinine bağlanması sağlanır.

7. Substrat İlavesi:Kuyucuklara, tespit antikoruna konjuge edilen enzime özel bir substrat çözeltisi eklenir. Enzimin varlığında substrat, renkli veya floresan bir ürün üreten bir reaksiyona girer.

8. Kolorimetrik veya Florometrik Tespit:Her bir kuyucuğun absorbansı (kolorimetrik tespit için) veya floresansı (florometrik tespit için) bir mikroplaka okuyucu kullanılarak ölçülür.

9. Veri Analizi:Elde edilen absorbans veya floresans değerleri, Bt proteininin bilinen konsantrasyonları kullanılarak oluşturulan standart bir eğri ile karşılaştırılır. Bu, mısır örneğinde mevcut olan Bt proteininin miktarının belirlenmesine olanak sağlar.

ELISA, Bt proteininin varlığını ve miktarını tespit ederek, Bt mısırını Bt olmayan mısır örneklerinden tanımlamak ve ayırt etmek için kullanılabilir. Pozitif sonuçlar Bt proteininin varlığını gösterirken, negatif sonuçlar Bt proteininin olmadığını veya testin tespit limitinin altındaki seviyeleri gösterir.